欢迎访问《中国医药导报》编辑部！

特应性皮炎（atopic dermatitis，AD）是临床常见的慢性、复发性、炎症性皮肤疾病。流行病学资料显示，我国成人AD的患病率为6.13%，1～7岁儿童患病率达12.94%，1～12个月婴儿患病率达30.48%[1-2]。AD的反复发作严重影响患者的身心健康和生活质量，给社会医疗带来了沉重负担[3-4]。AD的发病机制涉及遗传、环境、感染、免疫反应和皮肤屏障受损等，而皮肤屏障受损是AD发生的重要病因[5]。皮肤屏障位于皮肤的最上层，是由蛋白质和脂质构成的复合体，其结构通常被称为“砖和砂浆”[6]。富含蛋白质的角质细胞嵌入细胞间基质中，类似“砖块”，塑造了角质层的机械强度，其中80%为角质形成细胞（keratinocyte，KC）；“砂浆” 成分即细胞间的非极性脂质，主要由神经酰胺（ceramide，CER）、胆固醇和游离脂肪酸组成，故修复皮肤屏障是治疗AD的主要手段，而改善KC和CER对于修复皮肤屏障至关重要[7]。

沙棘是一种药食同源的中药[8]。沙棘籽可压榨成沙棘籽油，其中含有超过85%的不饱和脂肪酸和丰富的甾醇，能滋润皮肤、延缓皮肤衰老、改善皮肤微循环、保持肌肤光滑有弹性[9]。研究表明，沙棘及其衍生物可以治疗AD，尤其对皮肤屏障的修复作用显著[10]。本研究旨在探讨其是否通过改善KC和CER等来修复皮肤屏障。

1 对象与方法

1.1 实验动物

6～8周龄健康SPF级雄性BALB/c小鼠42只，体重18～22 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物使用许可证号：SYXK[北京]2023-0011，实验动物生产许可证号：SCXK[北京]2021-0006，实验动物合格证号：110011241108524732。小鼠饲养于北京中医药大学良乡校区动物实验室动物房IVC通气笼，环境温度（23±2）℃，湿度40%～60%，每天自由饮水进食。本研究经北京中医药大学学术委员会实验动物伦理分委员会批准（BUCM-2024090601-3213）。

1.2 主要仪器与试剂

2，4-二硝基氟苯（2，4-dinitrofluorobenzene，DNFB）（美国Sigma公司，M24318031）；蓖麻油聚氧乙烯醚（上海麦克林生化科技股份有限公司，61791-12-6）；肉豆酸异丙酯（山东西亚化学有限公司，I811858）；二乙二醇乙醚（上海麦克林生化科技股份有限公司，D806762）；沙棘籽油（上海源叶生物科技有限公司，S27305）；角蛋白1 ELISA试剂盒（武汉云克隆科技股份有限公司，SEA492Mu）；小鼠神经酰胺ELISA试剂盒[赞城（天津）科技有限公司，AE5714A]。

MPA4型皮肤多探头测试仪（德国Courage+Khazakz公司）；伯乐iMark吸收光酶标仪（美国Bio-Rad公司）；MV-100涡旋混匀仪（武汉赛维尔生物科技有限公司）；Zetasizer 3000马尔文激光散射粒径测定仪（英国马尔文仪器有限公司）；ST16R高速冷冻离心机（美国Thermo Sorvall公司）。

1.3 实验分组及处理

1.3.1 药物制备沙棘籽油纳米乳膏制备参照Shen等[11]制备沙棘籽油纳米乳膏工艺，肉豆酸异丙酯∶聚氧乙烯蓖麻油∶沙棘籽油=5%∶16%∶20%，助乳化剂为二乙二醇乙醚，质量比（Km）=4∶1。处方用200 r/min的恒温磁力搅拌器配制5 min，直到完全混合。将蒸馏水缓慢加入处方中，滴入搅拌，直到形成透明的纳米乳，此为低剂量组药物（16.0%沙棘籽油含量）；中剂量组药物（27.6%沙棘籽油含量）处方为肉豆酸异丙酯∶聚氧乙烯蓖麻油∶沙棘籽油=5%∶16%∶40%；高剂量组药物（43.2%沙棘籽油含量）处方为肉豆酸异丙酯∶聚氧乙烯蓖麻油∶沙棘籽油=5%∶16%∶80%，其余操作不变；通过激光散射粒径测定仪测定其平均粒径为（18.31±0.42）nm。

沙棘籽油纳米乳膏基质制备：肉豆酸异丙酯∶聚氧乙烯蓖麻油=5%∶16%，助乳化剂为二乙二醇乙醚（Km=4∶1）。处方用200 r/min的恒温磁力搅拌器配制5 min，直到完全混合。将蒸馏水缓慢加入处方中，滴入搅拌，直到形成透明的纳米乳；通过激光散射粒径测定仪测定其平均粒径为（17.27±0.14）nm。

1.3.2 分组及处理采用随机数字表法将42只小鼠分为正常组、模型组、阳性药组、基质组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组6只。

除正常组外，其余各组小鼠涂抹DNFB反复刺激皮肤制备AD小鼠模型，造模过程参考文献[12]。具体方法：DNFB致敏前1 d，用电推剪和脱毛膏配合脱去小鼠背部毛发，面积约2.0 cm×2.5 cm。实验第1、4、8、11、15天，除正常组外，其余组小鼠背部皮肤均匀涂抹2% DNFB溶液（丙酮、橄榄油、DNFB配制2%DNFB溶液，橄榄油∶丙酮=1∶4）30 μl，正常组小鼠在背部涂抹等量基质溶液（橄榄油∶丙酮=1∶4）；实验第18、24天改用0.2%DNFB溶液致敏刺激，正常组小鼠涂抹等量基质溶液不变。AD造模成功的标准：经皮肤组织病理学检测可见表皮见细胞间水肿或海绵形成，棘层细胞间水肿，真皮浅层淋巴细胞浸润等。实验第29天进行药物干预，正常组和模型组正常饲养，阳性药组涂抹0.1%泼尼松龙乳膏1 g，基质组涂抹沙棘籽油纳米乳膏基质1 g，低、中、高剂量组分别涂抹相应浓度的沙棘籽油纳米乳膏1 g，1次/d，连续7 d。

1.4 观察指标及检测方法

1.4.1 实验动物处理与取材实验第36天，各组小鼠使用2%戊巴比妥钠溶液麻醉后，摘眼球取血，处死，无菌条件下取小鼠皮损处皮肤组织，以4%多聚甲醛溶液固定保存；其他皮损组织-80 ℃保存，用于指标检测。

1.4.2 皮损评分用数码相机隔天拍照，记录小鼠背部皮损动态变化。参考文献[13-14]拟定小鼠皮肤严重程度评分标准。针对红斑、渗出/结痂、干燥/脱屑、剥脱/糜烂每一项皮损表现评定相应程度的评分，具体评分标准见表1。

1.4.3 皮肤含水量和经皮水分丢失（trans epidermal water loss，TEWL）检测平展小鼠背部剃毛区域，采用CM825和TM300探头，在同一时间、环境（室温25～27 ℃，湿度50%～60%）下，随机选择小鼠背部三处皮损处皮肤测量皮肤含水量和TEWL，检测结果取平均值。

1.4.4 皮肤pH值检测平展小鼠背部剃毛区域，采用pH905探头，在同一时间、环境（室温25～27 ℃，湿度50%～60%）下，随机选择小鼠背部三处皮损处皮肤测量pH值，检测结果取平均值。

1.4.5 角蛋白1检测取小鼠背部皮损组织制备匀浆，检测组织匀浆中的角蛋白1含量，操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.4.6 CER检测取小鼠背部皮损组织制备匀浆，检测组织匀浆中的CER含量，操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.5 统计学方法

采用SPSS 29.0统计学软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料用均数±标准差（ pagenumber_ebook=8,pagenumber_book=3

±s）表示，组间比较采用独立样本t检验或单因素方差分析；不符合正态分布的计量资料采用中位数（M）和四分位数（P25，P75）表示，组间比较采用秩和检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同时间点小鼠背部皮损表现

实验第29天，皮损表现为红斑、丘疹、水肿、渗出、结痂、剥脱、糜烂、干燥及鳞屑等，造模成功。实验第36天，除正常组无变化外，各组小鼠皮损较治疗前均有不同程度的好转，如红斑变淡，鳞屑减少，水肿、干燥好转；阳性药组，低、中、高剂量组小鼠皮损恢复明显；模型组，基质组，低中、高、剂量组小鼠皮损渗出/结痂变化不明显。见图1。

2.2 沙棘籽油纳米乳膏对AD模型小鼠不同皮损状态的影响

与模型组比较，基质组及低、中、高剂量组红斑、干燥/ 脱屑、剥脱/ 糜烂评分及总分降低（P＜0.05）。与基质组比较，低、中、高剂量组红斑、干燥/ 脱屑、剥脱/糜烂评分及总分降低（P＜0.05）。与低剂量组比较，中剂量组红斑评分及总分降低（P＜0.05）；高剂量组红斑、干燥/脱屑评分及总分降低（P＜0.05）。与中剂量组比较，高剂量组干燥/ 脱屑评分及总分降低（P＜0.05）。见表2。

2.3 沙棘籽油纳米乳膏对AD模型小鼠皮损区皮肤含水量、TEWL、pH值的影响

与正常组比较，模型组皮肤含水量降低，TEWL、pH值升高（P＜0.05）。与模型组比较，低、中、高剂量组皮肤含水量升高，pH值降低（P＜0.05）；基质组及低、中、高剂量组TEWL降低（P＜0.05）。与基质组比较，低、中、高剂量组皮肤含水量升高，TEWL、pH值降低（P＜0.05）。与低、中剂量组比较，高剂量组皮肤含水量升高（P＜0.05）。见表3。

2.4 沙棘籽油纳米乳膏对AD模型小鼠皮损区角蛋白1与CER含量的影响

与正常组比较，模型组角蛋白1、CER含量降低（P＜0.05）；与模型组比较，低、中、高剂量组角蛋白1、CER含量升高（P＜0.05）；与基质组比较，低、中、高剂量组角蛋白1、CER含量升高（P＜0.05）；与低剂量组比较，中剂量组CER含量升高（P＜0.05），高剂量组角蛋白1、CER含量升高（P＜0.05）。见表4。

3 讨论

AD的发病机制目前认为与免疫异常、皮肤屏障功能障碍、皮肤菌群紊乱等因素有关，其中皮肤屏障功能障碍是AD研究的热点之一[2,7]。

皮肤屏障位于皮肤的最外层，是由蛋白质和脂质构成的复合体，其结构被称为“砖和砂浆”[6]。“砂浆”成分主要由CER、胆固醇和游离脂肪酸组成。不同分化阶段的KC表达不同的角蛋白，Zhang等[15]研究发现，角蛋白1和角蛋白10是已知正常表皮中KC终末分化的标志物。角蛋白1是在角质化过程中合成的第1个蛋白，是表皮基底上层角质形成细胞的主要角蛋白，故提高角蛋白1含量对皮肤屏障修护有重要作用[16-17]。细胞间脂质在KC分化过程中形成，其中CER是维持皮肤屏障功能必不可少的脂类，在减少TEWL和保持皮肤水分含量中起重要作用。角蛋白1、CER为皮肤屏障成分测量指标，而皮损评分、皮肤含水量、TEWL、pH值是进行皮肤屏障功能评估的常用无创性指标。

根据AD发病特点和皮损特征，其属于中医学“四弯风”“奶癣”等范畴，其发病多因先天不足，禀赋不耐，脾失健运，湿热内生，复感风湿热邪，病久不愈，伤阴耗血，血虚风燥，肌肤失养所致[18]。皮肤呈现干燥、粗糙、肥厚、鳞屑、抓痕、血痂等表现。在临床上，外治多用油剂、乳膏剂等滋润。

沙棘是一种药食同源的中药。沙棘籽油是从沙棘籽中提取出的天然油脂，可用于美容、烧伤、紫外线损伤、皮炎等治疗，其可促进皮肤再生、减轻组织炎症、促进伤口愈合[19]。而乳膏剂是治疗皮肤屏障受损的首选剂型。同时采用纳米技术，粒径较小的粒子更容易通过透皮吸收，因此相比传统的乳膏剂，纳米乳膏可能具有更加优异的透皮性能，使得药物渗透性、吸收性更佳，更有利于药物到达病位并发挥疗效。本研究结果显示，沙棘籽油纳米乳膏能在一定程度上改善皮损状况，可缓解红斑、结痂、干燥、鳞屑，减少TEWL，增加皮肤含水量，降低pH值。与模型组、基质组比较，低、中、高剂量组红斑、干燥/ 脱屑、剥脱/ 糜烂评分及总分降低；皮肤含水量及角蛋白1、CER含量升高，TEWL、pH值降低。而低、中、高剂量组与模型组、基质组比较，皮损渗出/ 结痂评分无差异，可能与沙棘籽油为油剂，阻碍皮损渗出有关。与模型组比较，基质组红斑、干燥/ 脱屑、剥脱/ 糜烂改善明显，皮损渗出/结痂未改善，可能与基质中聚氧乙烯蓖麻油等油性物质的滋润修复作用有关，而不利于皮损的渗出/结痂改善。与模型组比较，基质组对TEWL有改善作用，而对角蛋白1、CER含量、皮肤含水量、pH值无改善，可能与含有的聚氧乙烯蓖麻油等油性物质滋润、减少水分蒸发有关。

综上所述，本研究推测沙棘籽油纳米乳膏可能通过促进KC表达角蛋白1的形成并且增加细胞间脂质CER含量，增加皮肤含水量和减少TEWL，进而修复受损的皮肤屏障，恢复其正常生理功能，达到治疗AD的作用。在此基础上，后续将进一步从皮肤屏障组成的细化类别上，如不同种类的角蛋白含量，CER脂质链长度等角度，探讨沙棘籽油纳米乳膏改善皮肤屏障功能的具体效应机制。

利益冲突声明：本文所有作者均声明不存在利益冲突。

[1]DANDAN M，JIAQING L，SHUOSHUO L，et al.Prevalence and risk factors of atopic dermatitis in Chinese adults：a nationwide population-based cross-sectional study [J].Chin Med J（Engl），2023，136（5）：604-606.

[2]中华医学会皮肤性病学分会免疫学组，特应性皮炎协作研究中心.中国特应性皮炎诊疗指南（2020版）[J].中华皮肤科杂志，2020，53（2）：81-88.

[3]DRUCKER A M，WANG A R，LI W Q，et al.The Burden of Atopic Dermatitis：Summary of a Report for the National Eczema Association [J].J Invest Dermatol，2017，137（1）：26-30.

[4]TSAI T F，RAJAGOPALAN M，CHU C Y，et al.Burden of atopic dermatitis in Asia [J].J Dermatol，2019，46（10）：825-834.

[5]THYSSEN J P，KEZIC S.Causes of epidermal filaggrin reduction and their role in the pathogenesis of atopic dermatitis[J].J Allergy Clin Immunol，2014，134（4）：792-799.

[6]ELIAS P M.Epidermal lipids，barrier function，and desquamation[J].J Invest Dermatol，1983，80（1 Suppl）：44s-49s.

[7]王海燕，陈达灿，晏烽根.特应性皮炎中西医发病机制的比较与思考[J].中国中西医结合杂志，2018，38（6）：737-740.

[8]中华人民共和国国家卫生健康委员会.卫生部关于进一步规范保健食品原料管理的通知[EB/OL].（2023-02-28）[2002-10-20].http：//www.nhc.gov.cn/wjw/gfxwj/201304/e33 435ce0d894051b15490aa3219cdc4.shtml.

[9]党晓宏，高永，汪季，等.沙棘林能源价值及平茬复壮技术研究[J].干旱区资源与环境，2013，27（2）：176-180.

[10]GU Y，WANG X，LIU F，et al.Total flavonoids of sea buckthorn（Hippophae rhamnoides L.）improve MC903-induced atopic dermatitis-like lesions [J].J Ethnopharmacol，2022，292：115195.

[11]SHEN Q，WANG M，TANG X，et al.Preparation of a Hippophae rhamnoides Linn oil nanoemulsion and the visualization of its transdermal permeation [J].J Chi Pharm Sci，2019，28（8）：579-594.

[12]KIM T H，KIM G D，AHN H J，et al.The inhibitory effect of naringenin on atopic dermatitis induced by DNFB in NC/Nga mice[J].Life Sci，2013，93（15）：516-524.

[13]HANIFIN J M，THURSTON M，OMOTO M，et al.The eczema area and severity index（EASI）：assessment of reliability in atopic dermatitis EASI Evaluator Group.[J].Exp Dermatol，2001，10（1）：11-18.

[14]王珊，马琳.特应性皮炎严重程度的评估[J].中国医学文摘（皮肤科学），2016，33（2）：154-159.

[15]ZHANG X，YIN M，ZHANG L J.Keratin 6，16 and 17-Critical Barrier Alarmin Molecules in Skin Wounds and Psoriasis[J].Cells，2019，8（8）：807.

[16]廖倩，于春水，汪瀚文.皮肤屏障中分化蛋白的研究进展[J].实用皮肤病学杂志，2017，10（6）：354-356.

[17]刘玉峰，王刚.天然自身抗体[M].北京：人民卫生出版社，2002：171-183.

[18]檀贤.儿童期特应性皮炎中医证型分布研究及与皮肤屏障相关性分析[D].武汉：湖北中医药大学，2013.

[19]沈琪，王梅，康金森.沙棘油对小鼠变应性接触性皮炎的治疗作用[J].中国比较医学杂志，2017，27（11）：50-55.

【作者机构】	北京中医药大学中医学院
【分类号】	R275.9
【基金】	中央引导地方科技发展资金项目——京津冀重点产业链成果转化项目（246Z2403G）北京中医药大学大学生创新训练计划项目（X202410026062）。

沙棘籽油纳米乳膏对特应性皮炎小鼠皮肤屏障修复的影响研究

目录

文内图表