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蜈蚣为蜈蚣科动物少棘巨蜈蚣的干燥体，其味辛，性温，有毒，归肝经。具攻毒散结、通络止痛、息风镇痉之功[1]。蜈蚣首载于《神农本草经》，列为下品[2]。蜈蚣的主要成分包括脂类、氨基酸、蛋白质等，具有镇痛抗炎、抗心肌缺血、抗肿瘤、抗凝血等药理作用[3]。浙江岱山为蜈蚣道地药材产地，因其头部为金黄色，足为红色，具有油漆样光泽，俗称“金头蜈蚣”，其质量明显优于其他产地蜈蚣[4]。蜈蚣的加工流程为捕捉后，取竹片插入其头尾部位，将虫体绷直，再进行干燥处理[5]。历代文献中对蜈蚣的炮制方法多有记述，其中不加辅料的炮制方式涵盖生用、炒炙、焙制、煨制及烧存性等；而加辅料的炮制则包括酒炙、姜炙、醋炙、葱汁炙、荷叶炙、薄荷叶煨、香油炙、羊油炙等[6]。目前多以焙法为主，列入2020版《中华人民共和国药典》[1]，因其炮制工艺参数不明，缺乏统一的炮制规范与质量标准，致使饮片质量参差不齐，从而影响临床疗效的稳定性。“焙”是中药炮制中一种常用的方法，指将经过净选处理的药物放入金属容器或锅内，以文火进行加热，过程中不断翻动药物，经过较短时间的加热后，直至药物颜色加深，质地酥脆为度[7]。故研究以蜈蚣科动物少棘巨蜈蚣的干燥体为研究对象，考察焙制温度、焙制时间、翻面频率对综合评分的影响，结合响应曲面法，找寻焙蜈蚣的最佳炮制工艺参数，为蜈蚣药材的深入研究和临床应用提供坚实的科学依据和技术支撑。

1 仪器与材料

安捷伦1260型高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；FA1004N型万分之一分析天平（上海精密仪器有限公司）；KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；111B型二两装高速中药粉碎机（瑞安市永利制药机械有限公司）；GZX-9076MBE型电热鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；HH-6型数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；低速离心机TDL-80-2C型（上海安亭科学仪器）。

次黄嘌呤对照品（批号：wkq23051912）购于四川维克奇生物科技有限公司；色谱级甲醇购于赛默飞世尔科技（中国）有限公司；分析级甲醇购于四川西陇科学有限公司；水为娃哈哈纯净水。

本研究收集湖北、安徽、浙江、江苏不同产地蜈蚣药材10批次，经江西中医药大学中药鉴定室刘应蛟副教授鉴定为正品。蜈蚣药材质量均符合2020年版《中华人民共和国药典》[1]标准，样品信息见表1。

2 方法与结果

2.1 炮制方法

取净蜈蚣，除去头足，文火焙至黑褐色，剪断，放凉[8]。

2.2 测定方法的确定

2.2.1 色谱条件色谱柱：Welch Ultimate Polar RP18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；纯水（A）-甲醇（B）为流动相进行梯度洗脱（0～22 min，100%A；22～35 min，100%→60%A)，流速设定为0.5 ml/min，柱温控制在30 ℃，检测波长为300 nm。进样体积为10 μl，在该条件下次黄嘌呤分离度较好，结果见图1。

2.2.2 对照品溶液的制备精密称取次黄嘌呤对照品2.5 mg，置于25 ml容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀，即得0.1 mg/ml的次黄嘌呤对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备精密称取蜈蚣粉末（过4号筛）2.0 g，置于具塞锥形瓶中，加入50 ml 50%甲醇溶液，密封瓶口，称定重量，于90 ℃下水浴回流30 min，取出放冷至室温，称重，用50%甲醇溶液补重，摇匀，离心（4 000 r/min，6 min），取上清液经0.22 μm微孔滤膜滤过，即得，备用。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察精密吸取次黄嘌呤对照品溶液5.0、2.0、1.0、0.5 ml，分别置于10 ml容量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，摇匀；再取“2.2.2”项下的对照品溶液适量，制成5份不同质量浓度的对照品溶液，在“2.2.1”项下对应色谱条件进样，以次黄嘌呤峰面积（Y）为纵坐标，质量浓度（X）为横坐标，得回归方程为：Y=83 127X-20.391，R2=0.999 9，可见次黄嘌呤对照品在0.005～0.100 mg/ml范围内有良好的线性关系。

2.3.2 精密度试验精密吸取次黄嘌呤对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样6次，得次黄嘌呤峰面积，计算RSD值为0.67%，提示仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性试验取同一蜈蚣炮制品供试品溶液适量，室温下分别放置0、2、4、6、8、10、12 h，在“2.2.1”项下色谱条件进样，测得次黄嘌呤峰面积，求得RSD值为1.93%，提示供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.3.4 重复性试验精密称取同一蜈蚣炮制品粉末6份，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，测得次黄嘌呤含量为0.543 9～0.567 7 mg/g，平均含量为0.464 5 mg/g，RSD值为1.95%，提示该方法重复性良好。

2.3.5 加样回收率试验取已知次黄嘌呤含量的蜈蚣药材6份，分别加入适量对照品溶液，制备成待测溶液，在“2.2.1”项色谱条件下进样测定，记录峰面积，计算得到次黄嘌呤的平均加样回收率为99.44%，RSD值为1.77%，提示该方法准确可行，结果见表2。

2.4 外观性状评价

2020年版《中华人民共和国药典》[1]对焙蜈蚣的性状描述为：棕褐色或灰褐色，具焦香气；2008年版《江西省中药饮片炮制规范》[9]描述为：背部棕绿色或墨绿色，有光泽，腹部淡黄色或棕黄色，皱缩，质脆，断面有裂隙；故选择质地、色泽为考察对象，采用随机盲法进行评判，评价标准见表3。

2.5 醇溶性浸出物含量测定

精确称量2.0 g蜈蚣各炮制品粉末，置于250 ml锥形瓶中，向锥形瓶内加入50%乙醇溶液50 ml，称重，静置1 h后，连接冷凝管，加热回流1 h。待溶液冷却后，再称定重量，用50%乙醇补足重量，过滤，精密量取25 ml滤液于已干燥恒重的蒸发皿中，蒸干滤液，放入烘箱中干燥3 h，随后放入干燥器中冷却30 min，精密称重。以干物质质量计算浸出物含量。

2.6 综合评分权重的确定

2.6.1 层次分析法权重确定层次分析法是一种系统化的多准则决策方法，通过构建层次结构模型，对评价指标进行主观经验判断，最终通过数字计算确定各因素的权重，对定性问题评估[10]。浸出物得率能够较全面反映炮制方法的优劣，同时能够反映中医药的整体观[11]。故3个评价指标的优先顺序为次黄嘌呤＞醇溶性浸出物含量＞外观性状评分。使用SPSSPRO软件，将3个成分权重系数设为方案层，综合评分设为决策目标，建立比较的优先判断矩阵，计算得到3个评价指标的权重系数分别为0.53896、0.29726、0.16378，通过计算，指标权重分析一致性检验结果：CI=0.005、CR=0.009。其中CI≠0，CR＜0.1，提示优先级判断矩阵一致性良好，指标权重系数有效，可用于指标赋权，见表4。

2.6.2 综合评分确定综合评分=（次黄嘌呤含量/ 次黄嘌呤含量最大值）×53.896+（醇溶性浸出物含量/醇溶性浸出物含量最大值）×29.726+（外观性状评分/外观性状评分最大值）×16.378。

2.7 单因素考察

2.7.1 焙制温度考察称取同一批次、大小均匀蜈蚣生品5份，将焙制温度分别设置为80、90、100、110、120 ℃，焙制时间为15 min，翻面频率为15次/min，通过不同的焙制温度得到5份炮制样品。结果显示，当焙制温度为90 ℃时，所制得的炮制品的综合评分达到最高，最终将蜈蚣焙制温度优化范围为80～100 ℃，结果见表5。

2.7.2 焙制时间考察称取同一批次、大小均匀蜈蚣生品5份，将焙制时间分别设置为5、10、15、20、25 min，焙制温度为90 ℃，翻面频率为15次/min，通过不同的焙制时间得到5份炮制样品。结果显示当焙制时间为20 min时，所制得的炮制品的综合评分达到最高，最终将蜈蚣焙制时间优化为15～25 min，结果见表5。

2.7.3 翻面频率考察称取同一批次、大小均匀蜈蚣生品5份，设置翻面频率分别为5、10、15、20、25次/min，焙制温度为90 ℃，焙制时间为20 min，得不同翻面频率的炮制样品。结果显示，其翻面频率为15次/min时，综合评分最高，故确定蜈蚣翻面频率优化为5～15次/min，结果见表5。

2.8 响应面法优化工艺试验

2.8.1 响应面实验设计在单因素实验结果下以A（焙制时间）、B（焙制温度）、C（翻面频率）为影响因素。采用Box-Behnken响应面法，利用Design Expert13软件进行分析，试验因素与水平见表6。实验方案及结果见表7。

2.8.2 结果分析利用Design Expert 13软件对实验结果数据进行拟合分析，得二次多项式方程综合评分=94.28+0.965 3A-1.37B-0.674 3C-0.134 1AB+6.16AC-3.47BC-5.31A2-9.83B2-6.90C2。方差分析结果见表8，拟合得到P＜0.000 1、失拟项P=0.418 6（＞0.05），显示模型极具显著性且模型拟合良好。提示在本研究所建立的模型具有统计学意义。根据F值可知各因素贡献率为B＞A＞C，即焙制温度＞焙制时间＞翻面频率，二项式中A2、B2、C2 均呈极显著影响，且F值较高。其中相关系数R2=0.988 2，决定系数R2=0.973 0，变异系数=1.58%。本研究建立的模型科学准确可用于蜈蚣焙制工艺优化。

绘制各因素对焙蜈蚣评分影响的响应曲面图，以及各单因素之间两两交互作用的关系图。相关结果如图2所示。曲面的陡峭程度与等高线的密集程度呈正相关，这一特征越明显，提示该因素对评分的影响越突出[12]。从图2结合方差分析可知，焙制时间（A）和焙制温度（B）对蜈蚣焙制工艺影响最显著。根据回归模型预测，焙蜈蚣最佳工艺为焙制时间20.499 min，焙制温度89.271 ℃，翻面频率10.069次/min。根据实际操作，将预测所得最佳工艺进行调整，即焙制时间20 min，焙制温度90 ℃，翻面频率10次/min。

2.8.3 工艺验证按最佳条件进行3次验证试验，结果显示，平均综合评分为96.786 7分，RSD值为0.62%，与预测值94.396分之间的差距小，提示该模型预测性良好，所得最佳炮制工艺稳定可行。

2.9 含量测定

测定10批蜈蚣炮制前后次黄嘌呤含量，结果显示，10批生品含量为0.321 5～1.187 1 mg/g，均值0.690 2 mg/g，炮制品含量为0.484 9～1.371 2 mg/g，均值0.888 8 mg/g，炮制品中次黄嘌呤含量增高，结果见表9。

3 讨论

次黄嘌呤具有扩张气管的作用[13]。其他研究显示，次黄嘌呤能显著抑制毒激素-L诱导的脂解作用，表明次黄嘌呤有望成为预防肿瘤恶病质中脂肪耗竭的有效药物之一[14]。故本研究将次黄嘌呤作为测定指标之一。

蜈蚣最常用的炮制方法是焙制法[3]。蜈蚣躯干与头足所含的微量元素相同，惟躯干微高，去头足可相对提高微量元素含量[7]。本研究的最佳炮制工艺：焙制温度90 ℃，焙制时间20 min，翻面频率10次/min。对10批样品进行含量测定，含量相对稳定。

蜈蚣是通络止痛、攻毒散结、熄风镇痉之要药，经炮制后其毒性降低，在临床上应用非常广泛[5]。炮制工艺的优化旨在确保蜈蚣药材的治疗效果与安全性，同时最大限度地降低其可能存在的毒性。目前蜈蚣的炮制工艺纷繁多样，质量参差不齐，在很大程度上影响了药材质量。蜈蚣作为一味常用中药，为确保安全用药，针对蜈蚣的炮制工艺开展了研究。为了充分利用蜈蚣的药用价值并最大化其药效，建议未来在炮制过程中，根据不同人群的需求差异，灵活选择适宜的炮制方法。未来若能成功实现蜈蚣的去毒减毒及活性成分的高效提取，不仅将提升其在中药材产业中的竞争力，还有望推动整个行业向更加安全、高效、可持续的方向发展，使蜈蚣真正成为中药材产业中的优势品种。

利益冲突声明：本文所有作者均声明不存在利益冲突。

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【作者机构】	¹江西中医药大学附属医院药学部； ²江西中医药大学药学院
【分类号】	R283.3
【基金】	江西省重点研发计划项目（20232BBG70013）。

焙蜈蚣炮制工艺优化

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