金水六君煎出自明代名医张景岳的《景岳全书·卷五一·新方八阵·和阵》，由当归、熟地黄、陈皮、半夏、茯苓、炙甘草和生姜7味中药组成，主治肺肾虚寒、水泛为痰、或年迈阴虚、血气不足、外受风寒、咳嗽呕恶、喘逆多痰等证，于2018年被国家中医药管理局发布的《古代经典名方目录（第一批）》收录，多用于慢性阻塞性肺疾病、慢性支气管炎等肺系疾病的治疗，效果较好[1-5]。研究表明金水六君煎可减少哮喘发作小鼠数量，缓解哮喘小鼠症状，降低哮喘小鼠肺指数及肺湿干重比值，具有一定平喘作用[6]；还可减少慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡破裂融合现象，增加其每分钟通气量、吸气峰流量、呼气峰流量[7]。临床研究表明，金水六君煎辅助治疗慢性支气管炎急性发作期可提高临床效果[8]。

金水六君煎作为经典名方，其药效学研究较多，尚缺乏相关的毒理学研究。为了更系统评价金水六君煎颗粒临床用药的安全性，本研究以小鼠为研究对象，对金水六君煎颗粒进行了急性毒性实验和亚急性毒性实验，为制订该药的临床用药方案提供依据。

1 对象与方法

1.1 实验动物

90只5～7周龄昆明小鼠，雌雄各半，体重16～18 g，购自锦州医科大学，SPF级，实验动物使用许可证编号：SYXK[辽]2019-0007，实验动物生产许可证号：SCXK[辽]2019-0003，实验动物合格证号：21077224 1100000424。本研究自觉遵守实验动物福利伦理原则，在锦州医科大学动物实验中心，分笼饲养，室温20～26 ℃，相对湿度40%～60%，12 h光照周期，自由饮水和摄食。适应性喂养3 d进行实验。本研究经锦州医科大学实验动物伦理委员会批准（20240093）。

1.2 仪器与试剂

金水六君煎颗粒（批号：2023121101）由本溪国家中成药工程技术研究中心提供；苏木精-伊红染色试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司，货号：C0105S）；电子天平（测量精度为0.1 mg，瑞士Mettle Toledo公司）；Z326K低温高速台式离心机（上海赵迪生物科技有限公司）；VeritonD430光学显微镜（日本OLYMPUS公司）；RM2235组织切片机（德国徕卡公司）；EG1160一体式石蜡包埋机（德国徕卡公司）。SMT-120VP全自动多功能生化分析仪（成都斯马特科技有限公司）；BC-5000Vet兽用全自动血液细胞分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）。

1.3 实验分组及处理

1.3.1 急性毒性实验

采用常规的急性毒性实验方法[9-10]。取10只昆明小鼠，雌雄各半，分笼饲喂，根据预实验结果（小鼠无死亡，不能求出半数致死量LD50），采用最大给药量评价金水六君煎颗粒对小鼠的急性毒性作用。金水六君煎颗粒在三蒸水中的最大溶解度为0.55 g/ml，小鼠的最大灌胃给药体积为0.8 ml，按小鼠的平均体重30 g计算，则每只小鼠按14.7 g/kg灌胃给药1次，24 h内灌胃给药3次（每次间隔5 h），最后1次灌胃给药2 h后提供饲料。

1.3.2 亚急性毒性实验

配药：分别取61.6、30.8、15.4 g金水六君煎颗粒于112 ml三蒸水中，搅拌溶解，配成0.550、0.275、0.137 g/ml浓度梯度的药品，按照最大灌胃给药体积为0.8 ml，小鼠的平均体重30 g计算，即金水六君煎颗粒高（14.7 g/kg）、中（7.35 g/kg）、低（3.675 g/kg）剂量，放置4 ℃冰箱备用，每周配制1次。

80只昆明小鼠按照随机数字表法分为空白组，金水六君煎颗粒低、中、高剂量组，各20只，雌雄各半。除空白组小鼠每日按0.2 ml/10 g灌服三蒸水外，其他各组小鼠按上述剂量连续灌胃给药30 d，每天给药前禁食4 h，给药2 h后提供饲料。

1.4 观察指标及检测方法

1.4.1 急性毒性实验

连续14 d观察小鼠的精神状态等一般状况、死亡情况，14 d后解剖小鼠，观察小鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器外观变化。

1.4.2 亚急性毒性实验

1.4.2.1 一般情况观察及体重记录 给药期间，每天都对小鼠的精神状态、呼吸系统的临床症状、摄食、饮水、粪便、尿液等一般情况进行观察。分别于灌胃给药前（第0天），给药后第7、14、21、30天称量各组小鼠体重并记录。

1.4.2.2 血常规及血生化指标检测 末次给药后，禁食不禁水12 h，麻醉，眼眶采血。小鼠血样分别按抗凝血和促凝血处理，抗凝血样品通过兽用全自动血液细胞分析仪检测血常规，包括血红蛋白（125.0～182.0 g/L）、红细胞计数（6.60～12.18）×1012/L]、白细胞计数[（2.50～15.8）× 109/L]、中性粒细胞计数 [（0.60～10.80）×109/L]、嗜酸性粒细胞计数[（0.00～0.88）×109/L]、嗜碱性粒细胞计数[（0.00～0.20）×109/L]、淋巴细胞计数[（0.58～10.60）×109/L] 和单核细胞计数[（0.00～1.12）×109/L]。促凝血样品通过全自动多功能生化分析仪检测血生化指标，包括谷丙转氨酶活性（28.0～132.0 U/L）、谷草转氨酶活性（59.0～269.0 U/L）、尿素（4.00～11.80 mmol/L）、肌酐（12.0～71.0 μmol/L）、总胆固醇（0.93～4.04 mmol/L）、甘油三酯（0.62～2.63 mmol/L）、总蛋白（36.0～72.0 g/L）、白蛋白（25.0～48.0g/L）和葡萄糖含量（3.44～10.67mmol/L）。

1.4.2.3 脏器外观形态观察 采血后处死小鼠并解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要器官的色泽、硬度、形态等有无异常。

1.4.2.4 脏器指数的测定 剖检小鼠前称小鼠体重，剖检后对小鼠的心、肝、肾进行分离，称其质量[11-12]。

脏器指数=脏器质量（g）/体重（g）×100%。

1.4.2.5 苏木精-伊红 染色 对各组小鼠的心脏、肝脏和肾脏进行组织病理学检查，即用4%多聚甲醛固定组织样本后进行组织修块，放入包埋盒中脱水，包埋组织块于石蜡中；将包埋好的组织切成5 μm厚的薄片，脱蜡，苏木精-伊红染色、封片；最后于光学显微镜下观察组织病理学变化，并进行拍照[13-15]。

1.5 统计学方法

采用SPSS 26.0统计学软件进行数据分析。符合正态分布计量资料采用均数±标准差（）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用t检验；不符合正态分布的计量资料采用中位数（四分位数）[M（P25，P75）]表示，比较采用非参数检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 急性毒性实验

与空白组小鼠比较，金水六君煎颗粒组小鼠无死亡，精神状态良好，被毛整齐，摄食、饮水正常，粪便成形，无稀便、血便，尿液正常；实验结束后对小鼠进行剖检，其心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏均无肿大、出血、黏连等异常变化，无任何肉眼可见的病理变化。小鼠口服金水六君煎颗粒的最大给药量为44.1 g/kg。

2.2 亚急性毒性实验

2.2.1 金水六君煎颗粒对小鼠一般情况的影响

与空白组小鼠比较，各给药组小鼠无死亡，精神状态正常，食欲旺盛，被毛整齐，粪便、尿液无异常，未出现呼吸急促、困难、喘息、腹式呼吸，口鼻、眼结膜发绀及弓背等呼吸系统异常的临床症状；心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏肉眼观察均正常。

2.2.2 金水六君煎颗粒对小鼠体重的影响

随着饲养时间的延长，第7、14、21、30天时，各组小鼠的体重均呈增长趋势。见图1。

图1 金水六君煎颗粒对小鼠体重的影响（n=10）

2.2.3 金水六君煎颗粒对小鼠脏器指数的影响

各给药组小鼠心脏指数、肝脏指数和肾脏指数与空白组小鼠比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 金水六君煎颗粒对小鼠脏器指数的影响（）/[M（P25，P75）]

2.2.4 金水六君煎颗粒对小鼠血常规指标的影响

与空白组雄性小鼠比较，金水六君煎低剂量组雄性小鼠嗜碱性粒细胞下降（P＜0.05）；其他各组雌雄小鼠血常规指标与空白组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 金水六君煎颗粒对小鼠血常规指标的影响（）/[M（P25，P75）]

注 与空白组比较，aP＜0.05。

2.2.5 金水六君煎颗粒对小鼠血生化指标的影响

与空白组雄性小鼠比较，金水六君煎颗粒高剂量组雄性小鼠血清中的尿素氮水平降低（P＜0.01）；其他各组雌雄小鼠的血生化指标与空白组小鼠比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 金水六君煎颗粒对小鼠血生化指标的影响（）/[M（P25，P75）]

注 与空白组比较，aaP＜0.01。

2.2.6 金水六君煎颗粒对小鼠主要器官组织形态的影响

与空白组小鼠比较，各给药组小鼠的主要器官未见明显病变。各给药组雌、雄性小鼠心肌细胞的形态及排列正常，无炎症细胞浸润，组织间隙无异常变化；肝脏组织结构正常，肝细胞呈辐射状排列于中央静脉周围，细胞形态清晰；肾小球及各级肾小管组织结构完整，细胞排列紧密，肾单位结构清晰，未见组织病理学变化。见图2～4。

图2 金水六君煎颗粒对小鼠心脏组织形态学的影响（苏木精-伊红染色，400×）

图3 金水六君煎颗粒对小鼠肝脏组织形态学的影响（苏木精-伊红染色，400×）

图4 金水六君煎颗粒对小鼠肾脏组织形态学的影响（苏木精-伊红染色，400×）

3 讨论

金水六君煎颗粒具有补肾纳气、燥湿化痰之功，标、本兼治之效，其安全性评价对临床用药具有重要意义[4,16]。急性毒性实验和亚急性毒性实验是药物安全性评价的重要环节，小鼠是毒理学实验中广泛使用的受试对象[17-18]。在急性毒性实验中，LD50 是评价急性毒性实验的一个重要指标，LD50 越大，药物越安全[19-20]。本研究未求出LD50，则采用最大给药量评价金水六君煎颗粒对小鼠的急性毒性作用[19]。最大给药量是指在急性毒性实验中，以合理的最大浓度、动物能耐受的最大体积，单次或一日内多次给予动物的药量，以观察药物毒性反应[20]。本研究结果显示金水六君煎颗粒组小鼠精神状态良好，被毛整齐，摄食、饮水正常，粪便成形，无稀便、血便，尿液正常，小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏均无肿大、出血、粘连等异常变化，无任何肉眼可见的病理变化。小鼠灌胃金水六君煎颗粒的最大给药量为44.1 g/kg（相当于成人给药量3.58 g/kg），将其按体表面积转换为成人（以平均体重70 kg计）的药量为250.6 g。金水六君煎颗粒的成人日口服剂量为18 g，则本研究中小鼠的最大给药量是日成人用量的14倍。根据急性毒性（LD50）剂量分级标准，金水六君煎颗粒属于实际无毒级别，在临床推荐口服剂量范围内是安全的[9,21-22]。

动物的临床表现、体重变化和脏器指数等对药品毒性反应的评估具有重要意义。在亚急性毒性实验中，金水六君煎颗粒各剂量组小鼠的精神状态、饮食、粪便、尿液等一般状况均正常，金水六君煎颗粒对小鼠的体重、心脏指数、肝脏指数和肾脏指数均无影响。心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏肉眼观察均正常。HE染色显示金水六君煎颗粒对小鼠的心脏、肝脏、肾脏组织形态无影响。血常规和血生化检测是评价药物对机体和组织器官功能变化的重要指标，能够评估药物对血细胞及肝肾功能的损伤[23-25]。本研究发现，金水六君煎颗粒低剂量组雄性小鼠的嗜碱性粒细胞降低（P＜0.05），高剂量组雄性小鼠的尿素氮水平降低（P＜0.05），但这些异常指标均在正常值范围内。金水六君煎颗粒各剂量组雌、雄小鼠的其他血常规和血生化指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。

本研究未进行肺脏指数测定及组织病理学检查具有一定的局限性，但本研究未发现呼吸急促、困难、喘息、腹式呼吸，口鼻、眼结膜发绀及弓背等呼吸系统异常体征，提示金水六君煎颗粒对肺可能未造成损伤。通过检索现有文献发现，金水六君煎组方中的熟地黄对肝脏有一定影响[26]；当归、茯苓无明显毒性[27-28]；炙甘草对心肌和肝脏有影响[29]；半夏（法半夏）有轻微肝毒性[30-31]；兽用陈皮口服液无明显毒性[32]；未见上述成分损伤肺脏的报道。另外，本研究采用灌胃给药，药物主要经肝脏首过代谢和血液循环，其急性毒性更可能体现在代谢器官（肝脏）、排泄器官（肾脏）及循环系统核心器官（心脏）上。肺脏作为非主要代谢/排泄器官，且非首过暴露器官，在短期内成为主要致死靶器官的风险相对较低。基于上述风险评估，本研究优先考察金水六君煎颗粒对风险评估较高的脏器（心、肝、肾）的毒性。肺脏作为金水六君煎治疗呼吸系统疾病的靶器官，在长期安全性评估中具有重要意义。在后续长期毒性实验中，肺脏将被列为核心观察脏器，进行系统的组织病理学检查及功能测定，以全面评估其对呼吸系统的长期安全性。

综上所述，金水六君煎颗粒通过灌胃对小鼠的最大给药量为44.1 g/kg，相当于70 kg成人临床推荐日用剂量0.26 g/kg的14倍，属于实际无毒级别。本研究未发现金水六君煎颗粒明显的急性毒性和亚急性毒性，为其临床用药的安全性提供参考。

利益冲突声明：本文所有作者均声明不存在利益冲突。

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Study on the acute and subacute toxicity of Jinshui Liujunjian Granules

WANG Liang1 SHAO Ping2 ZHANG Ling3 HU Xiangka3 DAI Chunmei3
1.China Resources Sanjiu Medical &Pharmaceutical Co., Ltd., Guangdong Province, Shenzhen 518110, China; 2.Benxi National Engineering Research Center for the Pharmaceutics of Traditional Chinese Medicines Co.,Ltd.,Liaoning Province,Benxi 117004,China;3.Jinzhou Medical University,Liaoning Province,Jinzhou 121001,China

[Abstract] Objective To study the acute and subacute toxicity of Jinshui Liujunjian Granules in mice and evaluate its safety.Methods In the acute toxicity experiment,Jinshui Liujunjian Granules were administered to 10 mice by gavage three times within 24 hours at a dose of 14.7 g/kg.The mental state,death situation,and appearance of the organs were observed during 14 days.In the subacute toxicity experiment,the 80 mice were divided into control group,low (3.675 g/kg),medium(7.35 g/kg),and high (14.7 g/kg)dose groups of Jinshui Liujunjian Granules by random number method，with 20 mices in each group.The control group was treated with three distilled water,and the drug groups were treated with the above dose.The body weight of the mice was recorded.After 30 days,the histological morphology of the main organs in mice was observed,and the blood routine and blood biochemical indexes of the mice were detected.Results In the acute toxicity test,the maximum dose of Jinshui Liujunjian Granules in mice was 44.1 g/kg,there was no dead mice,and the mice were in good mental state with normal diet and feces,the appearance of heart,liver,splaen,lung，kidney,and other organs was normal.In the subacute toxicity test,Jinshui Liujunjian Granules had no effect on the body weight,heart index,liver index,kidney index,their morphology,the blood routine and blood biochemical indexes in mice.Conclusion Jinshui Liujunjian Granules have low toxic side effects and higher safety,which provides reference for the clinical medication.

[Key words] Jinshui Liujunjian Granules;Acute toxicity;Subacute toxicity

[中图分类号] R285.5

[文献标识码] A

[文章编号] 1673-7210（2025）09（b）-0049-07

DOI：10.20047/j.issn1673-7210.2025.26.10

[基金项目] 辽宁省科技厅揭榜挂帅科技攻关专项项目（2022JH1/10800106）。

[作者简介] 王亮（1978-），男，硕士，副主任药师，主要从事中药新药开发、中药大品种二次开发、中药工程技术研究工作。

[通讯作者] 代春美（1977-），女，博士，教授，主要从事中药药效学及大健康产品研发工作。

（收稿日期：2025-04-24）

（修回日期：2025-07-15）