围绝经期综合征是指女性在绝经前后性激素水平出现波动或减少，以月经不规律、潮热、盗汗、焦虑、抑郁、认知功能下降、骨质疏松、阴道干燥等为主要临床表现[1]。记忆力下降是常见的抱怨问题。雌激素与学习记忆能力密切相关，提高雌激素水平能改善学习记忆方面的缺陷[2]。然而，目前对于激素替代治疗能否改善围绝经期女性认知功能尚无统一定论[3]。研究表明，围绝经期综合征的发病机制包括内分泌系统改变、免疫功能异常、细胞凋亡、神经递质水平改变、自由基代谢紊乱和血管舒缩因子影响等，而内分泌系统改变与下丘脑-垂体-卵巢（hypothalamic-pituitary-ovarian，HPO）轴相关[4]。

二仙二至甘麦大枣汤是由邓奕辉教授治疗围绝经期综合征的经验积累形成，围绝经期综合征的病机主要是肾阴阳失调，同时还与心神失养有关。二仙二至甘麦大枣汤能缓解围绝经期综合征患者抑郁、焦虑和失眠症状，减少卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）和黄体生成素（luteinizing hormone，LH）的释放，降低不良反应[5-6]。本研究使用不完全摘除卵巢法构建围绝经期综合征模型，观察二仙二至甘麦大枣汤对围绝经期综合征模型大鼠学习记忆的影响及其机制。

1 对象与方法

1.1 实验动物

SPF级雌性SD大鼠36只，体重为200～220 g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（湘）2021-0002，实验动物使用许可证号：SYXK（湘）2024-0014，实验动物合格证号：430727241102540471。实验动物饲养于湖南中医药大学动物实验中心，自由饮水，普通饮食，环境温度为22～25℃，湿度为50%～55%。本研究经湖南中医药大学动物伦理委员会批准（HNUCM21-2408-03）。

1.2 研究药物

二仙二至甘麦大枣汤包括仙茅10 g、淫羊藿10 g、巴戟天10 g、当归10 g、黄柏5 g、知母5 g、女贞子10 g、墨旱莲10 g、浮小麦15 g、甘草10 g、大枣10 g、龙骨10 g、牡蛎10 g。所用中药配方颗粒和中药超微饮片由湖南春光九汇现代中药有限公司提供（批号分别为92240221、92230908、92230406、92231103、92231136、92240318、92240211、92230314、92230108、92231104、92231123、81240110、81230510）；戊酸雌二醇片购自广州拜耳医药保健有限公司（批号：J20171038）。

1.3 主要仪器与试剂

动物行为分析系统（型号：Lab Maze）购自北京众实迪创科技发展有限责任公司；超速冷冻离心机（型号：Heraeus Fresco 17）购自美国Thermo Fisher Scientific公司；脱水机（型号：JJ-12J）、包埋机（型号：JB-P5）购自武汉俊杰电子有限公司；病理切片机（型号：RM2016）购自上海徕卡仪器有限公司；数字玻片扫描分析系统（型号：Pannoramic MIDI）购自匈牙利3DHISTECH公司。

氨苄青霉素钠USP级（批号：A105483）购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone，GnRH）、LH、FSH、雌二醇（estradiol，E2）酶联免疫吸附试验试剂盒（货号：J3396-A、J3676-A、J21359-A、J3450-A）购自江苏晶美生物科技公司；HE染液（货号：G1005）购自武汉赛维尔生物科技有限公司。

1.4 实验分组及处理

36只大鼠适应性喂养1周后按照随机数字表法分为空白组、模型组、戊酸雌二醇组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组6只。造模方法参考文献[7]，摘除大鼠左侧卵巢和右侧80%卵巢建立围绝经期综合征模型，空白组仅摘除部分脂肪组织；术后腹腔注射氨苄青霉素钠（剂量：5万U/kg，0.3 ml/只），连续3 d。术后第6天起，每天09∶00时使用棉签法采集大鼠阴道脱落细胞，采用快速革兰染色法进行阴道涂片染色，连续5 d，若大鼠出现动情周期紊乱则表明造模成功[8]。

造模成功后，戊酸雌二醇组灌胃戊酸雌二醇药液0.09 mg/（kg·d），低、中、高剂量组分别灌胃二仙二至甘麦大枣汤1.904、3.807、7.614 g/（kg·d）。空白组及模型组灌胃生理盐水，持续1个月。中药液灌胃剂量按照配方颗粒和超微饮片与中药传统饮片进行等效剂量换算，得出成人剂量为42.3 g；再根据成人与大鼠用药剂量折算后系数（6.3），假设成人体重为70 kg，则中剂量组为3.807 g/（kg·d）。

1.5 观察指标及检测方法

1.5.1 旷场实验 旷场实验装置是由100 cm×100 cm×40 cm的无盖旷场箱和视频采集系统组成，将旷场箱分为中心区域和外周区域。从中心区域放入大鼠，计时5 min，记录大鼠活动总路程、活动总次数、中心区域活动时间和运动轨迹。

1.5.2 新物体识别实验 新物体识别实验分为3个阶段：适应期、熟悉期和测试期。适应期即旷场实验；24 h后进入熟悉期，将两个大小、形状、颜色均相同的粉色长方体（直径约为5 cm）对称放于实验箱内相邻的两个角落，大鼠背对物体放入箱内探索5 min；1 h后进入测试期，将其中1个旧物体替换为黄色圆柱体，大鼠探索5 min。采用人工记时，记录大鼠鼻尖距离物体＜2 cm的时间。识别指数=探索新物体时间/探索总时间，探索总时间为探索新物体时间与旧物体时间之和，用于评估大鼠学习记忆能力。

1.5.3 样本处理 行为学实验结束后，称取大鼠体重，按照40 mg/kg腹腔注射戊巴比妥钠麻醉大鼠。腹主动脉取血后常温静置2 h，以离心半径10 cm，4 ℃，3 000 r/min离心10 min，收集血清分装并放入-80 ℃冰箱中备用。取血后先剥离子宫和卵巢，再进行心脏灌注，最后断头取脑，将组织放入4%多聚甲醛中固定。

1.5.4 子宫湿重和子宫指数 记录大鼠子宫湿重并计算大鼠子宫指数。子宫指数=子宫湿重（mg）/体重（g）×100%。

1.5.5 E2、FSH、LH、GnRH水平 按照试剂盒说明书检测大鼠E2、FSH、LH、GnRH水平。

1.5.6 组织病理情况 下丘脑、垂体、子宫、卵巢组织经脱水、透明、包埋，制备5 μm切片，脱蜡复水后进行HE染色，常规脱水透明后封片，于显微镜下观察。

1.6 统计学方法

采用SPSS 27.0统计学软件进行数据分析。计量资料用均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，若方差齐，组间两两比较采用LSD-t法；若方差不齐，组间两两比较采用Dunnett’s T3法。两组间比较采用独立样本t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 二仙二至甘麦大枣汤对各组大鼠旷场实验结果的影响

与空白组比较，模型组活动总路程减少、平均速度减慢、中心区域活动时间缩短（P＜0.01）。与模型组比较，低、中、高剂量组活动总路程增加、平均速度增快（P＜0.01）；低、中、高剂量组与模型组中心区域活动时间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。低、中、高剂量组活动总路程、平均速度和中心区域活动时间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见图1、表1。

表1 各组大鼠活动总路程、平均速度和中心区域活动时间比较（±s）

注 与空白组比较，aaP＜0.01；与模型组比较，bbP＜0.01。

图1 各组大鼠旷场实验轨迹图

A：空白组；B：模型组；C：戊酸雌二醇组；D：低剂量组；E：中剂量组；F：高剂量组。

2.2 二仙二至甘麦大枣汤对各组大鼠学习记忆能力的影响

与空白组比较，模型组探索总时间缩短、识别指数降低（P＜0.01）。与模型组比较，低、中、高剂量组识别指数升高（P＜0.05或P＜0.01）；低、中、高剂量组与模型组探索总时间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。与低、中剂量组比较，高剂量组识别指数升高（P＜0.01）；低、中、高剂量组探索总时间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；低、中剂量组识别指数比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见图2、表2。

表2 各组大鼠探索总时间和识别指数比较（±s）

注 与空白组比较，aaP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.05，bbP＜0.01；与低剂量组比较，ccP＜0.01；与中剂量组比较，ddP＜0.01。

图2 各组大鼠新物体识别实验轨迹图

A：空白组；B：模型组；C：戊酸雌二醇组；D：低剂量组；E：中剂量组；F：高剂量组。

2.3 二仙二至甘麦大枣汤对各组大鼠子宫湿重和子宫指数的影响

与空白组比较，模型组子宫湿重和子宫指数降低（P＜0.01）；与模型组比较，低、中、高剂量组子宫指数升高（P＜0.05或P＜0.01）；低、中、高剂量组与模型组子宫湿重比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。低、中、高剂量组子宫湿重和子宫指数比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 各组大鼠子宫湿重和子宫指数比较（±s）

注 与空白组比较，aaP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.05，bbP＜0.01。

2.4 二仙二至甘麦大枣汤对各组大鼠性激素水平的影响

与空白组比较，模型组血清E2 水平降低，FSH、LH、GnRH水平升高（P＜0.01）。与模型组比较，高剂量组血清E2 水平升高（P＜0.01）；低、中、高剂量组血清FSH、LH、GnRH水平降低（P＜0.05或P＜0.01）。与低剂量组比较，中剂量组血清LH、GnRH水平降低（P＜0.01），高剂量组血清FSH、LH、GnRH水平降低（P＜0.05或P＜0.01）；与中剂量组比较，高剂量组血清FSH、GnRH水平降低（P＜0.01）；低、中、高剂量组血清E2 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

表4 各组大鼠血清E2、FSH、LH、GnRH水平比较（±s）

注 与空白组比较，aaP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.05，bbP＜0.01；与低剂量组比较，cP＜0.05，ccP＜0.01；与中剂量组比较，ddP＜0.01。E2：雌二醇；FSH：卵泡刺激素；LH：促黄体生成素；GnRH：促性腺激素释放激素。

2.5 二仙二至甘麦大枣汤对各组大鼠下丘脑、垂体、子宫、卵巢病理形态的影响

下丘脑HE染色结果显示，空白组下丘脑神经元数量较多，排列整齐，形态正常，结构完整，胞核清晰；模型组神经元数量减少，排列紊乱，可见大量神经元出现核固缩，深染；低、中、高剂量组神经元数量增多，排列稍整齐，神经元核固缩，深染程度减轻，其中以高剂量组改善最为明显。见图3。

图3 各组大鼠下丘脑病理图片（HE染色，200×）

A：空白组；B：模型组；C：戊酸雌二醇组；D：低剂量组；E：中剂量组；F：高剂量组。黑色箭头示正常神经元，红色箭头示变性神经元。

垂体HE染色结果结果显示，空白组腺垂体嗜碱性细胞间隙正常，分布规律；模型组腺垂体嗜碱性细胞部分胞体肿胀，细胞核深染，分布聚集；低、中、高剂量组腺垂体嗜碱性细胞胞体肿胀，细胞核深染情况改善，分布稍规律，其中以高剂量组改善最为明显。见图4。

图4 各组大鼠垂体病理图片（HE染色，200×）

A：空白组；B：模型组；C：戊酸雌二醇组；D：低剂量组；E：中剂量组；F：高剂量组。黑色箭头示嗜碱性细胞。

子宫HE染色结果显示，空白组子宫内膜较厚，被覆单层高柱状上皮细胞，细胞排列整齐，腺体丰富。模型组子宫内膜萎缩，被覆单层低柱状上皮细胞，细胞排列紊乱，腺体萎缩。低、中、高剂量组子宫内膜厚度有所增加，细胞排列紊乱和腺体萎缩均有一定程度的减轻。见图5。

图5 各组大鼠子宫病理图片（HE染色，200×）

A：空白组；B：模型组；C：戊酸雌二醇组；D：低剂量组；E：中剂量组；F：高剂量组。红色箭头示子宫内膜，黑色箭头示腺体。

卵巢HE染色结果显示，空白组卵巢结构正常，可见各级卵泡，颗粒细胞丰富，排列整齐；模型组各级卵泡数量减少，颗粒细胞层次减少，排列稀疏；低、中、高剂量组卵泡数量和颗粒细胞层次增多。见图6。

图6 各组大鼠卵巢病理图片（HE染色，200×）

A：空白组；B：模型组；C：戊酸雌二醇组；D：低剂量组；E：中剂量组；F：高剂量组。黑色箭头示各级卵泡。

3 讨论

中医学将围绝经期综合征归为“脏燥”“百合病”范畴。《黄帝内经》曰：“女子七七任脉虚，太冲脉衰少，天癸竭，地道不通，故形坏而无子也”。肾气渐衰，天癸衰竭，冲任虚损致精血气血亏虚，阴阳失衡，脏腑失调。围绝经期综合征以肾虚为本，多为虚证，常涉及心、肝、脾三脏[9]。二仙二至甘麦大枣汤为二仙汤（补肾阴阳侧重于补肾阳）、二至丸（补肾阴）、甘麦大枣汤（养心安神）三方合用，外加龙骨和牡蛎重镇安神、平肝潜阳，共同发挥补肾阴阳，养心安神的功效。在临床应用中，二仙二至甘麦大枣汤能有效治疗围绝经期患者焦虑、抑郁和失眠，降低血清FSH和LH水平[5-6]。

与自然老化模型比较，不完全去势模型不受大鼠月龄限制，实验周期短，成本较低[10]。相较于完全去势模型雌激素的突然衰竭，不完全去势模型能更准确地模拟临床围绝经期女性卵巢功能渐进性衰退和雌激素水平变化[11]。本研究中大鼠子宫湿重和子宫指数高于完全去势模型，提示不完全去势模型更接近自然围绝经期女性的生理状态[12]。雌激素在维持大脑稳态和功能方面起至关重要的作用，雌激素缺乏导致学习和记忆障碍、睡眠和情绪问题、潮热和疲劳等症状[13]。本研究中围绝经期综合征大鼠存在自主活动能力降低和焦虑样状态，而二仙二至甘麦大枣汤能改善其自主活动能力，但对焦虑情绪的改善有限。本研究中模型组探索总时间缩短、识别指数降低，提示围绝经期综合征大鼠记忆力损伤；低、中、高剂量组识别指数升高，提示二仙二至甘麦大枣汤对围绝经期综合征大鼠学习记忆的改善作用是特异性的，并不依赖于其运动兴奋作用。

本研究中围绝经期综合征大鼠下丘脑、垂体、子宫、卵巢有不同程度的病理改变，主要表现为下丘脑神经元数量减少，核固缩，深染；腺垂体嗜碱性细胞部分胞体肿胀，细胞核深染，分布聚集；子宫内膜和腺体萎缩；各级卵泡数量减少。作为HPO轴的启动中心，下丘脑弓状核脉冲性分泌GnRH，其主要受Kp神经元调控，通过垂体门脉系统传送至腺垂体[14-17]。在腺垂体中，GnRH与促性腺激素细胞表面的GnRH受体特异性结合，激活磷脂酶C通路产生肌醇三磷酸和二酰甘油，促使钙离子内流，合成释放FSH和LH[18]。在FSH和LH刺激下，卵巢分泌雌激素和孕激素，促进卵泡的发育和成熟[19]。围绝经期女性卵巢功能衰退使E2 水平骤降，负反馈作用减弱，引起GnRH脉冲频率增加，FSH和LH代偿性升高，内分泌稳态失衡，导致HPO功能紊乱[20]。二仙二至甘麦大枣汤发挥类雌激素样作用，通过提高血清E2 水平，加强对下丘脑的负反馈调节，有效抑制GnRH的合成与分泌，从而降低垂体分泌的FSH、LH水平，有效缓解HPO轴功能紊乱。

综上所述，二仙二至甘麦大枣汤可能通过调控HPO轴，改善内分泌紊乱，从而改善围绝经期综合征大鼠的学习记忆能力。本研究局限性在于未阐明药方涉及的具体信号通路，未来需要深入研究以揭示二仙二至甘麦大枣汤治疗围绝经期综合征的详细作用机制。

利益冲突声明：本文所有作者均声明不存在利益冲突。

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Explore the effects of Erxian Erzhi Ganmai Dazao Decoction on learning and memory abilities in perimenopausal syndrome rats based on the hypothalamic-pituitary-ovarian axis

LEI Fang1 CHEN Yanling1 LIU Wuchaonan1 YANG Jingjing1 HUANG Ruiyu2 ZHANG Mengge2 DENG Yihui2

1.School of Integrated Chinese and Western Medicine,Hunan University of Chinese Medicine,Hunan Province,Changsha 410208,China;2.School of Traditional Chinese Medicine,Hunan University of Chinese Medicine,Hunan Province,Changsha 410208,China

[Abstract] Objective To explore the effects of Erxian Erzhi Ganmai Dazao Decoction on learning and memory abilities of rats with perimenopausal syndrome rats based on the hypothalamic-pituitary-ovarian (HPO) axis.Methods Thirty-six SPF-grade female SD rats were selected,and they were divided into blank group,model group,Estradiol Valerate group,low-dose group,medium-dose group,and high-dose group according to the random number table method,with six rats in each group.Except for the blank group,the perimenopausal syndrome models were established in the rats of the remaining groups by the method of incomplete ovariectomy.The model establishment was considered successful when the rats showed disordered estrous cycles.After successful modeling,the Estradiol Valerate group was gavaged with Estradiol Valerate solution at a dose of 0.09 mg/(kg·d),the low-dose,mediumdose,and high-dose groups were respectively administered Erxian Erzhi Ganmai Dazao Decoction at doses of 1.904,3.807 g/(kg·d),and 7.614 g/(kg·d),and the blank group and model group were administered normal saline by gavage for one month.The open-field test was used to observe the changes in the spontaneous activities of rats in each group,and the new object recognition experiment was used to detect the learning and memory abilities and ovary tissues of rats in each group;the uterine wet weight and uterine index of rats in each group were compared;Enzyme-linked immunosorbent assay was employed to detect the levels of serum estradiol (E2),follicle-stimulating hormone(FSH),luteinizing hormone(LH),and gonadotropin-releasing hormone (GnRH) of rats in each group;and HE staining was utilized to observe the pathological morphological changes in the hypothalamus,pituitary gland,uterus,and ovary tissues of rats in each group.Results Compared with the blank group,the total activity distance of the model group decreased,the average speed slowed down,the activity time in the central area and the total exploration time shortened,and the recognition index,uterine wet weight,and uterine index decreased (P＜0.01).Compared with the model group,the total activity distance of the low-dose,medium-dose,and high-dose groups increased,the average speed increased,and the recognition index and uterine index increased(P＜0.05 or P＜0.01).Compared with the blank group,the level of serum E2 in the model group decreased,while the levels of FSH,LH,and GnRH increased(P＜0.01).Compared with the model group,the level of serum E2 in the high-dose group increased (P＜0.01);while the levels of serum FSH,LH,and GnRH in the low-dose,medium-dose,and high-dose groups decreased (P＜0.05 or P＜0.01).Compared with the blank group,the number of hypothalamic neurons in the model group decreased,neuronal nuclear contraction,and deeply staining;some basophils in the adenohypophysis had swollen cell bodies,deeply staining nuclei,and aggregated distribution;atrophy of the endometrium and glands;and the number of follicles and the granulosa cell at all levels layers had decreased.Compared with the model group,the number of hypothalamic neurons in the low-dose,medium-dose,and high-dose groups increased,neuronal nuclear contraction,while the degree of deeply staining had been reduced;the swelling of the basophils in the adenohypophysis and the deeply staining of the nuclei had improved;the thickness of endometrium had increased,and the atrophy of the glands had been alleviated to a certain extent;while the number of follicles and the granulosa cell at all levels layers had increase.Conclusion Erxian Erzhi Ganmai Dazao Decoction may improve the learning and memory abilities of rats with perimenopausal syndrome by regulating the HPO axis and improving endocrine disorders.

[Key words] Erxian Erzhi Ganmai Dazao Decoction;Hypothalamic-pituitary-ovarian axis;Perimenopausal syndrome;Learning and memory

[中图分类号] R711.7

[文献标识码] A

[文章编号] 1673-7210（2025）12（c）-0026-08

DOI：10.20047/j.issn1673-7210.2025.36.05

[基金项目] 湖南省科技创新团队项目（2020RC4050）；湖南省研究生科研创新项目（CX20240750）。

[作者简介] 雷芳（1999.8-），女，硕士，主要从事中西医防治糖尿病血管并发症及脑血管疾病研究工作。

[通讯作者] 邓奕辉（1970.6-），女，博士，教授，主要从事中医药防治脑血管疾病、内分泌代谢性疾病研究工作。

（收稿日期：2025-08-07）

（修回日期：2025-09-29）