DOI:10.20047/j.issn1673-7210.2025.36.07
中图分类号:R284.1
魏学鑫, 卜俊文, 袁娟丽, 叶喜德, 彭玲珍
| 【作者机构】 | 江西中医药大学药学院; 宜春市袁州区妇幼保健计划生育服务中心药剂科; 江西中医药大学附属医院肿瘤科 |
| 【分 类 号】 | R284.1 |
| 【基 金】 | 江西省中医药标准化技术委员会标准化项目(2024A031) 江西省重点研发计划项目(20232BBG70013)。 |
山药为薯蓣科植物薯蓣Dioscorea opposita Thunb.的干燥根茎。味甘,性平,归脾、肺、肾经,补脾养胃,生津益肺,补肾涩精,用于脾虚食少,久泻不止,肺虚喘咳等症[1]。山药始载于《神农本草经》,列为上品[2]。山药富含多糖、皂苷、尿囊素等活性物质,增强免疫力、抗衰老及治疗糖尿病等作用[3]。在山药众多炮制品中,仅有麸炒山药被2020年版《中华人民共和国药典》[1]收录。蜜麸炒山药是樟帮特色炮制品种,结合麦麸与蜂蜜的辅料特性,赋予山药独特的药效与风味。对山药生品及不同炮制品总黄酮含量进行测定,以蜜麸炒山药皮质部位的最高,黄酮类成分具有抗氧化作用,为山药研究提供参考依据[4]。本研究对不同批次山药进行鉴别和含量测定,拟定质量标准,为山药的深入研究和临床应用提供坚实的科学依据和技术支撑。
BSA224S-CW型十万分之一天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);FA1004N型万分之一天平(上海精密仪器有限公司);KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);111B型二两装高速中药粉碎机(瑞安市永利制药机械有限公司);GZX-9076MBE型电热鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂);HH-6型数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);Nikon DS-Ri2型显微成像系统(尼康仪器有限公司);UV-2550紫外分光光度计(苏州岛津公司);1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司);SX2-2.5-12N型马弗炉(上海一恒科学仪器有限公司)。
葡萄糖对照品(批号:WKQ-0776159,纯度≥98%);尿囊素对照品(批号:WKQ-0003182,纯度≥98%);腺苷对照品(批号:WKQ-0000895,纯度≥98%)均购自四川省维克奇生物科技有限公司;山药对照药材(批号:DYS8120,纯度:BR,上海索实生物科技有限公司);浓氨试液(上海博飞美科化学科技有限公司);苯酚(分析纯,国药集团化学试剂有限公司);硫酸(分析纯,成都市科隆化学品有限公司);乙醇(分析纯)、甲醇(分析纯)、乙酸乙酯(分析纯)均购自四川西陇科学有限公司;甲醇[色谱纯,赛默飞世尔科技(中国)有限公司];蜂蜜(上海冠生园蜂制品有限公司);水为娃哈哈纯净水。
本研究收集河南、河北不同产地山药16批,经江西中医药大学中药鉴定室刘应蛟副教授鉴定为薯蓣科植物薯蓣Dioscorea opposita Thunb.的干燥根茎,药材信息见表1。
表1 药材信息
蜜麸制备:将水与炼蜜混匀后,与麦麸搅拌均匀,置锅内,文火炒至不黏手,取出,放凉。蜜量为麦麸量的30%,水量为蜜量的50%,炮制时间90 s,炮制温度90 ℃[5]。
蜜麸炒山药:武火将锅底烧热,倒入蜜麸快速翻炒,待冒青烟时,投入山药片,不断翻炒,至转微黄取出,筛去蜜麸,晾凉。
方法:山药粉末显微制片,用解剖针挑取少量粉末放在载玻片上,滴1~2滴稀甘油,搅拌均匀,盖上盖玻片,用滤纸吸去多余液体,将制好的玻片放在显微镜下观察。见表2、图1。
图1 蜜麸山药显微图
A:草酸钙针晶束;B:淀粉粒;C:导管;D:螺纹导管、环纹导管。
表2 山药性状、显微鉴别
性状及显微鉴别结果:呈类圆形、椭圆形或不规则的厚片。表面类白色或淡黄白色,质脆,易折断,切面类白色,富粉性。气微,味淡、微酸,嚼之发黏。呈类圆形、椭圆形或不规则厚片。表面色泽加深,呈现微黄色,偶见局部焦斑,具特异焦香气。粉末类白色。淀粉粒单粒扁卵形、三角状卵形、类圆形或矩圆形,直径8~35 μm,脐点点状、人字状、十字状或短缝状,可见层纹;复粒稀少,由2~3分粒组成。草酸钙针晶束存在于黏液细胞中,长约至240 μm,针晶粗2~5 μm。具缘纹孔导管、网纹导管、螺纹导管及环纹导管直径12~48 μm。
参照2020年版《中华人民共和国药典》[1]山药项下的薄层色谱鉴别方法,分别于日光和紫外光灯(365 nm)下检视,见图2。
图2 山药生品及蜜麸山药薄层鉴别图
A:山药生品(日光下);B:山药炮制品(日光下);C:蜜麸山药生品(紫外光下);D:蜜麸山药炮制品(紫外光下)。1:山药对照药材;2~17:16批山药生品及炮制品。
参照2020年版《中华人民共和国药典》[1]第四部水分测定法(通则0832第二法)、总灰分测定法(通则2302)、水溶性浸出物测定法(通则2201)项下冷浸法,对16批山药生品及炮制品进行测定。
16批山药生品(S1~16)含水量为8.32%~14.06%,平均值为12.09%;总灰分为1.04%~4.22%,平均值为2.02%;水溶性浸出物含量为3.76%~13.56%,平均值为6.90%;测定结果见表3。
表3 山药生品水分、灰分和浸出物测定结果(n=2)
16批蜜麸山药(P1~16)含水量为5.69%~8.03%,平均值为7.23%;总灰分为1.22%~3.33%,平均值为2.01%;水溶性浸出物含量为4.59%~12.49%,平均值为7.12%;测定结果见表4。
表4 蜜麸山药水分、灰分和浸出物测定结果(n=2)
2.5.1 检测方法 采用紫外-可见分光光度法测定,多糖含量以无水葡萄糖计。供试品溶液和对照品溶液均于490 nm波长处测定吸光度。
2.5.2 对照溶液制备 取无水葡萄糖对照品,加水制成浓度25 μg/ml,作为对照品溶液。
2.5.3 供试品溶液制备 取山药粉末(过3号筛)0.4 g于具塞锥形瓶中,精密加水100 ml,水浴回流1 h,放冷,补重,离心(4 000 r/min,6 min),取上清液1 ml于25 ml容量瓶中,加水定容至刻度,吸取2 ml,置10 ml具塞试管中,加5%苯酚1 ml、硫酸5 ml,摇匀,60℃水浴反应15 min,放冷,加水至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
2.6.1 色谱条件 色谱柱:UItimateR Polar RP(5 μm,4.6 mm×250 mm);甲醇(A)-纯水(B)为流动相进行梯度洗脱(0~8 min,2%A;8~22 min,2%→25%A),进样量10 μl,流速0.5 ml/min,柱温30 ℃,检测波长224、260 nm。在该条件下进样成分与相邻峰均能有效分离,结果见图3。
图3 山药对照品及样品的高效液相色谱图
A:对照品溶液;B:供试品溶液。1:尿囊素;2:腺苷。
2.6.2 对照品溶液的制备 精密称取尿囊素对照品10 mg,置于10 ml容量瓶中,加水使其充分溶解后,定容至刻度,混合均匀,配成浓度为1 mg/ml的对照品储备液。再取1 ml对照品储备液于10 ml的容量瓶,加水定容至刻度,混合均匀,制成浓度为0.1 mg/ml的尿囊素对照品溶液。
精密称取腺苷对照品10 mg,置于50 ml容量瓶中,加水使其充分溶解后,定容至刻度,混合均匀,配成浓度为0.2 mg/ml的对照品储备液。再取1 ml对照品储备液于100 ml的容量瓶,加水定容至刻度,混合均匀,制成浓度为2 μg/ml的腺苷对照品溶液。
2.6.3 供试品溶液制备 取山药粉末(过3号筛),精密称取1.0 g,置于50 ml具塞锥形瓶中,加20%乙醇25 ml,超声处理20 min(功率240 W,频率45 kHz),放冷,补重,摇匀,0.22 μm微孔滤膜滤过,即得。
2.7.1 线性关系考察 取25.64 mg葡萄糖对照品置于25 ml容量瓶中,加水稀释10倍成浓度102.56 μg/ml的溶液作为母液,分别取母液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml置于6个10 ml具塞试管中,加水定容至刻度,制成不同质量浓度的对照品溶液。取腺苷对照品5.64 mg置于50 ml容量瓶中,加水定容至刻度,作为腺苷对照品溶液;取尿囊素对照品5.67 mg置于10 ml容量瓶中,加腺苷对照品溶液2 ml,加水定容至刻度,作为混合对照品母液;分别取母液2 ml置于25 ml容量瓶中、1 ml置于10 ml容量瓶中、2 ml置于10 ml容量瓶中、1 ml置于2 ml容量瓶中,均加水定容至刻度,再取适量混合对照品母液,制成5份不同质量浓度的对照品溶液。测定吸光度及峰面积,分别以多糖的吸光度、尿囊素和腺苷的峰面积(Y)为纵坐标,质量浓度(X)为横坐标,进行线性回归,在线性范围内有良好的线性关系,结果见表5。
表5 各成分线性关系
2.7.2 精密度试验 取“2.5.2”项下的对照品溶液,按“2.5.1”项下的检测方法测定吸光度6次,得多糖的RSD为0.09%;取“2.6.2”项下的对照品溶液,按“2.6.1”项下的色谱条件进样6次,得尿囊素、腺苷的RSD分别为0.59%、0.64%,提示仪器精密度良好。
2.7.3 稳定性试验 精密吸取“2.5.3”项下的供试品溶液,室温下放置0、0.5、1.0、1.5、2、2.5、3 h,按“2.5.1”项下的检测方法测定吸光度,得多糖的RSD为1.15%;取“2.6.3”项下的供试品溶液,室温下放置0、2、4、6、8、12 h,按“2.6.1”项下的色谱条件进样,得尿囊素、腺苷的RSD分别为1.30%、0.42%,提示供试品稳定性良好。
2.7.4 重复性试验 按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液,平行6份,按“2.5.1”项下的检测方法测定吸光度,得多糖的RSD为2.09%;按“2.6.3”项下方法制备供试品溶液,平行6份,在“2.6.1”项下的色谱条件测定,得尿囊素、腺苷的RSD分别为1.66%、0.71%,提示该方法重复性良好。
2.7.5 加样回收率试验 精密称取已知成分含量的山药供试品0.5 g,共6份,分别加入适量对照品,分别按“2.5.3”“2.6.3”项下方法制备供试品溶液,记录吸光度、峰面积,得多糖、尿囊素、腺苷的平均加样回收率分别为99.07%、102.98%、98.07%,RSD分别为2.58%、1.31%、0.91%,提示该方法准确可行。
分别按“2.5.3”“2.6.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.5.1”“2.6.1”项下方法测定16批山药生品及炮制品中多糖、尿囊素、腺苷含量。
16批山药生品(S1~16)多糖含量为12.162 8~205.475 4 mg/g,平均值为95.768 1 mg/g;尿囊素含量为2.098 3~3.772 6 mg/g,平均值为2.951 1 mg/g;腺苷含量为0.047 2~0.090 3 mg/g,平均值为0.070 5 mg/g。见表6。
表6 山药生品含量测定
16批蜜麸山药(P1~16)多糖含量为47.951 0~279.059 9 mg/g,平均值为153.800 0 mg/g;尿囊素含量为2.562 8~4.636 6 mg/g,平均值为3.315 8 mg/g;腺苷含量为0.057 3~0.102 3 mg/g,平均值为0.081 7 mg/g,结果见表7。
表7 蜜麸山药含量测定
樟帮蜜麸炒山药采用双重辅料蜜麸对药物进行炮制,既借麦麸健脾和中之力,又合蜂蜜甘缓益脾之效,更好地缓和了生品燥烈之性,增强理气健脾的功效,并使得饮片色泽更加艳丽有光泽[6]。
宿婷婷等[7]从多个维度对山药的质量标志物进行预测分析,初步预测了山药多糖、薯蓣皂苷元、尿囊素、尿嘧啶、腺苷等成分可作为山药的质量标志物。多糖具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等功效,在保健食品和药品的开发方面具有广阔的应用前景[8-9]。尿囊素不仅有滋润皮肤的作用,还具有局麻和促进皮肤伤口愈合的功能[10-11]。腺苷具有舒张血管、抗心律失常和保护心肌的作用[10、12-13]。研究发现,尿囊素还被用于治疗糖尿病、骨髓炎、肝硬化及癌症[14-15]。故本研究拟以多糖、尿囊素和腺苷的含量作为蜜麸炒山药的质量标准指标,山药经蜜麸炒后多糖、尿囊素和腺苷含量整体均有不同程度的升高。
综上所述,初步规定蜜麸炒山药的性状为形如山药,断面黄白色或淡黄色,部分渐变黄色,偶见焦斑,略有焦香气;显微鉴别与薄层鉴别同山药项;建议水分≤10.0%,总灰分≤4.0%。根据平均值下浮20%,建议水溶性浸出物≥5.70%,尿囊素含量≥2.65 mg/g,多糖含量≥123.04 mg/g,腺苷含量≥0.07 mg/g。
本研究初步拟定了蜜麸山药的质量标准,为后续相关研究提供了实验依据。但2个产地16批样品的测定结果不足以代表所有山药的质量标准,需开展更多相关研究以完善其质量标准。
利益冲突声明:本文所有作者均声明不存在利益冲突。
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Study on quality standard of Zhangbang honey bran stir fried Dioscoreae Rhizoma
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